Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca⁺⁺ CP β4 (m): sc-419412

Présentation

Cacnb4 code la sous-unité auxiliaire β4 des canaux calciques voltage‑dépendants de type L, en régulant le trafic des canaux, leur stabilité membranaire et les cinétiques d’ouverture/fermeture qui façonnent l’afflux de Ca²⁺ dans les tissus excitables. En modulant l’entrée de calcium dépendante de l’activité, β4 influence des cascades de signalisation dépendantes du Ca²⁺ qui relient la dépolarisation membranaire à la libération de neurotransmetteurs, à la transcription génique et à la plasticité synaptique. Dans des modèles murins, une fonction altérée de Cacnb4 perturbe l’excitabilité neuronale et la synchronisation des réseaux, reliant cette voie à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques ainsi qu’à une susceptibilité aux crises. Le rôle de la protéine dans le contrôle de la composition des canaux calciques la rend également pertinente pour l’étude de la maturation des circuits et des réponses de stress cellulaire dépendantes de l’activité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP β4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cacnb4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cacnb4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cacnb4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine L-type Ca++ CP β4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cacnb4 pour l'étude de la signalisation de L-type Ca++ CP β4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cacnb4 essentiels à la fonction de L-type Ca++ CP β4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cacnb4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le L-type Ca++ CP β4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le L-type Ca++ CP β4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cacnb4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le L-type Ca++ CP β4 plasmide HDR (m) et le L-type Ca++ CP β4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cacnb4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cacnb4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.