L-type Ca⁺⁺ CP β4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419412

Visão geral

Cacnb4 codifica a subunidade auxiliar β4 dos canais de cálcio do tipo L dependentes de voltagem, regulando o tráfego do canal, a estabilidade na membrana e a cinética de abertura/fechamento que molda o influxo de Ca²⁺ em tecidos excitáveis. Ao ajustar a entrada de cálcio dependente da atividade, a β4 influencia cascatas de sinalização dependentes de Ca²⁺ que acoplam a despolarização da membrana à liberação de neurotransmissores, à transcrição gênica e à plasticidade sináptica. Em modelos murinos, alterações na função de Cacnb4 perturbam a excitabilidade neuronal e a sincronização de redes, relacionando essa via a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, bem como à suscetibilidade a convulsões. O papel da proteína no controle da composição dos canais de cálcio também a torna relevante para estudos de maturação de circuitos e de respostas celulares ao estresse dependentes da atividade.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP β4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cacnb4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cacnb4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cacnb4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína L-type Ca++ CP β4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cacnb4 para a investigação da sinalização de L-type Ca++ CP β4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cacnb4 críticos para a função L-type Ca++ CP β4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cacnb4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo L-type Ca++ CP β4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo L-type Ca++ CP β4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cacnb4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo L-type Ca++ CP β4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR L-type Ca++ CP β4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cacnb4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cacnb4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.