Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1D (h): sc-401745
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- L-type Ca++ CP α1D Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique L-type Ca++ CP α1D, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: L-type Ca++ CP α1D Antibody (E-3): sc-515679
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1D (h) | sc-401745 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CACNA1D code la sous-unité α1D (CaV1.3) formant le pore des canaux calciques de type L dépendants du voltage, qui couplent la dépolarisation membranaire à l’entrée de Ca2+ et à la signalisation en aval dépendante du Ca2+. CaV1.3 contribue au couplage excitation–transcription en modulant la dynamique du Ca2+ cytosolique, laquelle régule les voies calcium/calmoduline, les cascades de kinases et les programmes d’expression génique dépendants de l’activité. Dans les cellules excitables comme non excitables, l’activité de CACNA1D influe sur la différenciation cellulaire, la sécrétion et les propriétés électrophysiologiques via la modulation de l’homéostasie calcique. Des altérations génétiques et régulatrices de CACNA1D ont été associées à des troubles impliquant une signalisation électrique aberrante et un contrôle transcriptionnel dépendant du calcium, ce qui soutient des études mécanistiques de la fonction du canal dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP α1D (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CACNA1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CACNA1D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CACNA1D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine L-type Ca++ CP α1D.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CACNA1D pour l'étude de la signalisation de L-type Ca++ CP α1D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CACNA1D essentiels à la fonction de L-type Ca++ CP α1D
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CACNA1D pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le L-type Ca++ CP α1D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le L-type Ca++ CP α1D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CACNA1D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le L-type Ca++ CP α1D plasmide HDR (h) et le L-type Ca++ CP α1D (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CACNA1D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CACNA1D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.