Plasmide CRISPR d'Activation (h) KV1.1: sc-403806-ACT

KCNA1 code la sous-unité du canal potassique voltage‑dépendant humain KV1.1 (KCNA1), un déterminant majeur de la repolarisation membranaire et du déclenchement des potentiels d’action dans les cellules excitables. KV1.1 contribue aux courants potassiques (K+) rectificateurs retardés qui régulent l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique et la synchronisation des réseaux, en s’intégrant aux voies de contrôle de l’homéostasie ionique et de la signalisation dépendante de l’activité. Une altération de la fonction ou de l’expression de KCNA1 est associée à des troubles de la signalisation électrique, notamment l’ataxie épisodique et des phénotypes liés aux crises, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des canalopathies. In vitro, la modulation de KCNA1 soutient la recherche en électrophysiologie, sur les seuils d’excitabilité et sur les réponses transcriptionnelles en aval à des variations du potentiel de membrane.

KV1.1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KCNA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KV1.1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KCNA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KCNA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KV1.1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KCNA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KV1.1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KV1.1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KCNA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.