KRAS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416674-ACT

KRASは小型GTPアーゼをコードしており、GDP結合型とGTP結合型の間を循環する分子スイッチとして機能し、活性化受容体型チロシンキナーゼから下流エフェクターへシグナルを伝達します。活性型KRASは、RAF–MEK–ERK（MAPK）経路、PI3K–AKT–mTOR経路、RalGDSネットワークなどの主要経路を統合的に制御し、増殖・生存・代謝・細胞骨格ダイナミクスを調節します。正常な細胞運命決定と組織恒常性には、KRASシグナルの厳密な制御が必要です。KRAS活性の破綻や経路の再配線は、多様ながん種において、がん化、ストレス応答の変容、ならびに耐性に関連したシグナル適応にしばしば関与します。

KRAS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KRASの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KRAS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KRAS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKRAS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KRASの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKRAS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKRAS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKRAS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKRAS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。