Plásmido CRISPR de Activación (h) KLF17: sc-414317-ACT

KLF17 (factor 17 similar a Krüppel) es un factor de transcripción con dedos de zinc que regula programas de diferenciación epitelial y redes transcripcionales que controlan la adhesión celular, la polaridad y la motilidad. Al modular la expresión génica mediante la unión a promotores ricos en GC, KLF17 se conecta con vías vinculadas a la plasticidad epitelio-mesenquimal, la remodelación del citoesqueleto y salidas de señalización MAPK/PI3K dependientes del contexto. La expresión desregulada de KLF17 se ha asociado con fenotipos invasivos alterados y con la capacidad metastásica en múltiples modelos tumorales, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de la progresión y de las transiciones del estado celular. En células humanas, la actividad de KLF17 se investiga comúnmente en relación con circuitos de represión/activación transcripcional y la regulación de dianas posteriores asociadas a la EMT.

KLF17 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KLF17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KLF17 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KLF17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KLF17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KLF17. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KLF17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KLF17 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KLF17 en células tumorales con expresión de KLF17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.