KLF15 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402267-ACT

KLF15 (Krüppel-like factor 15) ist ein Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der zelltypspezifische Stoffwechsel- und Differenzierungsprogramme reguliert, indem er an GC-reiche Promotorelemente bindet und Transkriptionsnetzwerke koordiniert. In menschlichen Geweben trägt er zur Kontrolle der Genexpression der Glukoneogenese und des Lipidstoffwechsels bei, moduliert den Aminosäurekatabolismus und ist in hormonresponsive Signalwege eingebunden, die Nährstoffsensorik und Stressadaptation prägen. Die Aktivität von KLF15 beeinflusst mitochondriale und oxidative Stoffwechselprozesse und kann über eine breit angelegte transkriptionelle Reprogrammierung zelluläre Zustände verschieben. Eine fehlregulierte KLF15-Expression wurde mit metabolischen Phänotypen sowie Umbauprozessen in Muskel- und kardiovaskulär relevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Pathway-Studien unterstützt.

KLF15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KLF15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

KLF15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KLF15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KLF15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen KLF15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KLF15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von KLF15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des KLF15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KLF15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.