KIR6.1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401477-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KIR6.1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KIR6.1 Double Nickase Plasmid (h) e il KIR6.1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KCNJ8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KIR6.1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401477-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
KIR6.1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401477-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ8 codifica la subunità del canale del potassio a rettificazione verso l’interno KIR6.1, un componente centrale dei canali del potassio sensibili all’ATP (KATP) che mettono in relazione lo stato metabolico cellulare con l’eccitabilità di membrana. Interagendo con le subunità del recettore delle sulfoniluree, KIR6.1 contribuisce alla regolazione del tono della muscolatura liscia vascolare e di altri processi nelle cellule eccitabili tramite un gating dipendente da ATP/ADP e il conseguente controllo dell’ingresso di calcio e della contrattilità. Questa via di rilevamento metabolico influenza le risposte a ipossia, stress ischemico e deplezione energetica modulando il potenziale di membrana e l’eccitabilità. Variazioni genetiche o una disregolazione di KCNJ8 sono state associate a fenotipi cardiovascolari e legati all’eccitabilità, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sulla biologia dei canali ionici e sulla segnalazione bioenergetica.
KIR6.1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNJ8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNJ8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNJ8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNJ8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.