KIR4.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421231
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- KIR4.1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico KIR4.1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:KIR4.1 Anticorpo (1C11): sc-293252
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
KIR4.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421231 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Kcnj10 codifica o canal de potássio retificador de entrada KIR4.1, um regulador-chave do tamponamento de K⁺ e do potencial de membrana em células gliais e em outros tipos celulares de camundongo que expressam KIR4.1. Ao controlar a homeostase do potássio extracelular e acoplar o equilíbrio iônico ao transporte de água, o KIR4.1 sustenta a excitabilidade neuronal, a transmissão sináptica e a osmorregulação tecidual, com ligações funcionais à atividade da Na⁺/K⁺-ATPase e à redistribuição espacial de K⁺ mediada por astrócitos. Alterações na função do KIR4.1 têm sido associadas a sinalização neuróglial anormal, mudança na suscetibilidade a crises convulsivas e fenótipos neurodesenvolvimentais e neurológicos mais amplos, tornando o Kcnj10 um alvo relevante para estudos mecanísticos de biologia de canais iônicos e fisiologia glial. Em contextos experimentais, o KIR4.1 também é utilizado para investigar como a condutância de potássio influencia o metabolismo celular, a atividade de redes e as respostas a lesão ou inflamação.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kcnj10 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kcnj10, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kcnj10 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KIR4.1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kcnj10 para a investigação da sinalização de KIR4.1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kcnj10 críticos para a função KIR4.1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kcnj10 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo KIR4.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KIR4.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kcnj10. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo KIR4.1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KIR4.1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kcnj10 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kcnj10 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.