Ki67 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400081-ACT

O MKI67 codifica a proteína humana Ki67, um marcador nuclear de proliferação expresso ao longo das fases ativas do ciclo celular e amplamente ausente em células quiescentes. A Ki67 contribui para a organização da cromatina em níveis superiores e é necessária para a arquitetura adequada dos cromossomos mitóticos, dando suporte a processos como a progressão do ciclo celular, a dinâmica da cromatina associada à replicação de DNA e a mitose. Como indicador do índice proliferativo, a Ki67 é amplamente utilizada em estudos de homeostase tecidual e cinética de populações celulares, e a expressão alterada de MKI67 é frequentemente associada à proliferação desregulada na biologia do câncer e em outros estados hiperproliferativos. A modulação experimental de MKI67 dá suporte a investigações de programas transcricionais acoplados à proliferação e de vias de controle do ciclo celular.

Ki67 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MKI67 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ki67 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MKI67 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MKI67, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ki67. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MKI67 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ki67 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ki67 em células tumorais com expressão de MKI67 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.