Plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 32 (h): sc-410857

Présentation

KRT32 code la kératine 32, une kératine capillaire de type I qui polymérise avec des kératines de type II pour former des filaments intermédiaires essentiels à l’intégrité structurelle et à la résistance mécanique des fibres capillaires. En tant que composant du cytosquelette de kératine, KRT32 contribue à l’organisation du cytosquelette, aux programmes de différenciation épithéliale au sein des lignages du follicule pileux, ainsi qu’à l’assemblage de structures kératinisées. Une expression altérée ou une perturbation des réseaux de kératines capillaires est associée à des phénotypes de fragilité de la tige pilaire et fournit un indicateur exploitable pour étudier la dynamique d’assemblage des filaments de kératine. KRT32 est donc pertinent pour l’étude des réponses au stress cytosquelettique, du renouvellement des filaments de kératine et des relations génotype–phénotype en biologie du cheveu et dans les processus de kératinisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 32 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KRT32 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KRT32, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KRT32 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Keratin 32.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KRT32 pour l'étude de la signalisation de Keratin 32, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KRT32 essentiels à la fonction de Keratin 32
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KRT32 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Keratin 32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Keratin 32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KRT32. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Keratin 32 plasmide HDR (h) et le Keratin 32 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KRT32 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KRT32 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.