Keratin 32 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410857

Panoramica

KRT32 codifica la cheratina 32, una cheratina di tipo I specifica del capello che polimerizza con cheratine di tipo II per formare filamenti intermedi essenziali per l’integrità strutturale e la resilienza meccanica delle fibre del capello. Come parte del citoscheletro di cheratine, KRT32 contribuisce all’organizzazione del citoscheletro, ai programmi di differenziamento epiteliale nelle linee cellulari del follicolo pilifero e all’assemblaggio di strutture cheratinizzate. Un’espressione alterata o la perturbazione delle reti di cheratine del capello è associata a fenotipi di fragilità del fusto del capello e fornisce un readout sperimentale gestibile per studiare la dinamica di assemblaggio dei filamenti di cheratina. KRT32 è quindi rilevante per indagare le risposte allo stress citoscheletrico, il turnover dei filamenti di cheratina e le relazioni genotipo–fenotipo nella biologia del capello e nei processi di cheratinizzazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 32 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KRT32 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KRT32 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KRT32 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Keratin 32.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KRT32 per lo studio della segnalazione di Keratin 32, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KRT32 critici per la funzione di Keratin 32
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KRT32 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Keratin 32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Keratin 32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KRT32. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Keratin 32 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Keratin 32 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KRT32 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KRT32 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.