Plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 24 (h): sc-414948

Présentation

KRT24 code la kératine 24, une protéine de filament intermédiaire de type I qui contribue au réseau du cytosquelette dans les cellules épithéliales et soutient l’intégrité structurelle spécifique aux tissus ainsi que la résilience mécanique. Dans le cadre de l’assemblage et du remodelage des filaments de kératine, KRT24 s’intègre à des processus plus larges liés au cytosquelette et à l’adhérence, qui influencent la forme cellulaire, la polarité et la fonction barrière. Des modifications des profils d’expression des kératines sont fréquemment associées aux réponses au stress épithélial et aux changements d’état de différenciation, faisant de KRT24 un marqueur utile et un point d’entrée mécanistique pour étudier le remodelage épithélial dans des contextes pertinents pour les maladies. Une organisation dérégulée des filaments intermédiaires peut affecter le dialogue entre voies de signalisation et l’homéostasie cellulaire, ce qui justifie l’étude de KRT24 dans des modèles de dysfonctionnement épithélial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 24 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KRT24 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KRT24, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KRT24 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Keratin 24.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KRT24 pour l'étude de la signalisation de Keratin 24, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KRT24 essentiels à la fonction de Keratin 24
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KRT24 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Keratin 24 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Keratin 24 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KRT24. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Keratin 24 plasmide HDR (h) et le Keratin 24 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KRT24 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KRT24 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.