Plasmide Double Nickase (h) Keap1: sc-400190-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Keap1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Keap1 Double Nickase (h) et le plasmide Keap1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KEAP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Keap1 Antibody (G-2): sc-365626
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Keap1 | sc-400190-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Keap1 | sc-400190-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KEAP1 code Keap1, un adaptateur cytosolique de substrats pour le complexe ligase E3 d’ubiquitination CUL3–RBX1, qui contrôle le renouvellement protéasomal de NRF2 (NFE2L2) et module ainsi la réponse antioxydante et au stress électrophile. En détectant des modifications réactives de cystéines, Keap1 relie l’homéostasie rédox à des programmes transcriptionnels régissant la détoxification, le métabolisme du glutathion et la défense contre les xénobiotiques, tout en interagissant également avec l’autophagie via une régulation dépendante de p62/SQSTM1. La perturbation de l’axe KEAP1–NRF2 remodèle le métabolisme cellulaire et la signalisation inflammatoire, avec une large pertinence pour la biologie du stress oxydatif et l’adaptation au stress oncogénique. Une fonction KEAP1 dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte d’une expression altérée des gènes cibles de NRF2, de la fonction mitochondriale et de la résistance à des facteurs de stress environnementaux ou métaboliques dans des modèles de maladies humaines.
Keap1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KEAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KEAP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KEAP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KEAP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.