Plásmido CRISPR de Activación (h) karyopherin α2: sc-401484-ACT

KPNA2 codifica la carioferina alfa 2, un adaptador de la familia de importina-α que reconoce las señales clásicas de localización nuclear y coopera con la importina-β para mediar la importación nuclear regulada a través del complejo del poro nuclear. Al controlar el tráfico nucleocitoplasmático de factores de transcripción, proteínas de reparación del ADN y reguladores del ciclo celular, KPNA2 influye en los programas de expresión génica, la progresión mitótica y las respuestas al estrés. La alteración de la expresión de KPNA2 y de la dinámica de transporte se ha asociado con fenotipos proliferativos y redes de señalización desreguladas que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en investigación sobre estabilidad del genoma. KPNA2 también se utiliza como marcador de transporte nuclear perturbado, lo que permite estudios mecanísticos de la localización proteica y del control transcripcional.

karyopherin α2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KPNA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

karyopherin α2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KPNA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KPNA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de karyopherin α2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KPNA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de karyopherin α2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía karyopherin α2 en células tumorales con expresión de KPNA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.