Junctophilin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401805

Visão geral

O JPH2 codifica a junctofilina-2, uma proteína de ancoragem de membrana que estabiliza complexos de membrana juncionais entre a membrana plasmática/túbulos T e o retículo sarcoplasmático no músculo estriado. Ao manter o acoplamento em escala nanométrica entre os canais de Ca²⁺ do tipo L e os receptores de rianodina, a JUNCTOFILINA-2 sustenta o acoplamento excitação–contração e a liberação intracelular eficiente de Ca²⁺. A função de JPH2 interage com vias de manejo de Ca²⁺ que influenciam a contratilidade, a sinalização elétrica e programas transcricionais a jusante dependentes de cálcio. Alterações na expressão ou na organização de JPH2 têm sido associadas ao remodelamento dos túbulos T em cardiomiócitos e à homeostase de Ca²⁺ desregulada, características ligadas a cardiomiopatias hereditárias e adquiridas e a fenótipos arritmogênicos em modelos experimentais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene JPH2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do JPH2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do JPH2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Junctophilin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de JPH2 para a investigação da sinalização de Junctophilin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) JPH2 críticos para a função Junctophilin-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos JPH2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Junctophilin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Junctophilin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus JPH2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Junctophilin-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Junctophilin-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia JPH2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo JPH2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.