JHDM1D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405142-ACT

KDM7A (também conhecido como JHDM1D) codifica uma desmetilase de histonas contendo o domínio Jumonji C que modula a acessibilidade da cromatina ao remover marcas metiladas repressoras em resíduos de lisina da histona H3, moldando assim programas transcricionais. Por meio da regulação epigenética, JHDM1D influencia processos como a especificação do destino celular, a expressão de genes associada a linhagens e a coordenação de redes transcricionais do desenvolvimento e responsivas ao estresse. Dinâmicas desreguladas de metilação de histonas envolvendo KDM7A têm sido implicadas em estados transcricionais aberrantes relevantes para a transformação oncogênica e fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos do controle gênico dirigido pela cromatina. Sua atividade se intersecciona com vias epigenéticas mais amplas que acoplam o estado das modificações de histonas à transcrição dependente da RNA polimerase II e à manutenção da identidade celular.

JHDM1D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KDM7A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JHDM1D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KDM7A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KDM7A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JHDM1D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KDM7A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JHDM1D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JHDM1D em células tumorais com expressão de KDM7A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.