Plasmide CRISPR d'Activation (h) JAK1: sc-400439-ACT

La Janus kinase 1 (JAK1) est une tyrosine kinase non réceptrice qui transmet les signaux de multiples récepteurs de cytokines, notamment les récepteurs des interférons de type I et de type II, afin de réguler les réponses immunitaires innée et adaptative. Lors de l’activation du récepteur, JAK1 phosphoryle les facteurs de transcription STAT, déclenchant des programmes géniques qui contrôlent la défense antivirale, l’inflammation et la survie cellulaire ; elle s’inscrit également dans la dynamique plus large du réseau JAK–STAT, qui module la sensibilité aux cytokines et la régulation par rétrocontrôle. Des altérations de l’activité ou de l’expression de JAK1 ont été associées à une signalisation des cytokines dérégulée dans des troubles à médiation immunitaire, ainsi qu’à des phénotypes d’échappement immunitaire tumoral liés à une réponse altérée aux interférons. En tant que nœud central de signalisation, JAK1 est largement étudiée dans des voies qui gouvernent la biologie des cellules hématopoïétiques et épithéliales, les réponses au stress et les interactions (cross-talk) avec les voies MAPK et PI3K/AKT.

JAK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JAK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JAK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JAK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JAK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JAK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JAK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JAK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JAK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de JAK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.