IRS-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421151

Descripción general

Irs3 codifica el sustrato del receptor de insulina 3 (IRS-3), un adaptador citoplasmático que conecta los receptores activados de insulina y de IGF-1 con la señalización downstream a través de las vías PI3K–AKT y MAPK. Al proporcionar sitios de acoplamiento de fosfotirosina para proteínas con dominio SH2, IRS-3 contribuye a la regulación de la captación de glucosa, la síntesis de glucógeno, el metabolismo lipídico y la proliferación dependiente de factores de crecimiento. En modelos murinos, la alteración de la señalización de la familia IRS es ampliamente relevante para la resistencia a la insulina, la disfunción metabólica asociada a la obesidad y el crosstalk inflamatorio que influye en la homeostasis energética. El estudio de IRS-3 ayuda a desentrañar el sesgo de señalización específico por tejido y el comportamiento compensatorio de la red entre los parálogos de IRS en la biología metabólica y endocrina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IRS-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Irs3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Irs3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Irs3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IRS-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Irs3 para la investigación de la señalización de IRS-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Irs3 críticos para la función de IRS-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Irs3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IRS-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IRS-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Irs3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IRS-3 (m) y el plásmido HDR IRS-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Irs3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Irs3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.