IRS-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400474-ACT

Das humane Gen **IRS2** kodiert das Insulinrezeptor-Substrat 2 (IRS‑2), einen zytosolischen Adapter, der nachgeschaltet von Insulin- und IGF1-Rezeptoren an Tyrosinresten phosphoryliert wird und so die Rezeptorsignalgebung an die PI3K–AKT- und MAPK-Kaskaden koppelt. Durch die Rekrutierung von Effektoren mit SH2-Domäne integriert IRS‑2 Signale, die den Glukosestoffwechsel, Zellwachstum, Überleben und Differenzierung steuern, mit besonders wichtigen Funktionen in der hepatischen Insulinwirkung und der β‑Zell-Funktion. Eine veränderte IRS2-Signalgebung wird häufig im Kontext von Insulinresistenz, adipositasassoziierter metabolischer Dysfunktion und der Umprogrammierung von Signalwegen in der Krebsbiologie untersucht. IRS‑2 steht zudem mit nährstoffsensorischen und entzündlichen Eingängen in Verbindung, die Transkriptionsprogramme und zelluläre Stressantworten modulieren.

IRS-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IRS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IRS-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IRS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IRS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IRS-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IRS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IRS-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IRS-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IRS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.