IRGM Plasmide Double Nickase (h): sc-407889-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IRGM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IRGM Double Nickase Plasmid (h) e il IRGM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IRGM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IRGM Plasmide Double Nickase (h) | sc-407889-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRGM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407889-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IRGM (GTPasi M correlata all’immunità) è una GTPasi umana inducibile dall’interferone che coordina l’autofagia selettiva e la difesa immunitaria innata, con ruoli di primo piano nella xenofagia di patogeni intracellulari e nella regolazione della formazione e della maturazione degli autofagosomi. Interagisce con il macchinario dell’autofagia e con le vie di traffico di membrana per influenzare l’eliminazione dei batteri e la modulazione della segnalazione infiammatoria. Studi genetici e funzionali hanno collegato la disregolazione dell’autofagia associata a IRGM ad alterate interazioni ospite–microbo e a fenotipi infiammatori cronici, inclusi segnali di suscettibilità riportati nelle malattie infiammatorie intestinali e in disturbi correlati dell’immunità mucosale. In quanto nodo che connette autofagia, riconoscimento dei patogeni e risposte citochiniche, IRGM è spesso oggetto di studio in lavori sull’adattamento allo stress cellulare, sulla restrizione antimicrobica e sull’omeostasi infiammatoria.
IRGM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IRGM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IRGM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IRGM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IRGM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.