Plásmido CRISPR de Activación (h) IRF-4: sc-400288-ACT

El IRF4 humano codifica el factor regulador del interferón 4 (IRF-4), un factor de transcripción que define el linaje y moldea la diferenciación de las células inmunitarias y los programas de expresión génica dependientes de estímulos. IRF-4 coopera con PU.1, BATF y NF-κB para regular la accesibilidad de los potenciadores (enhancers) y los resultados transcripcionales que controlan la maduración de las células B, el desarrollo de las células plasmáticas, la activación de las células T y la producción de citocinas. Integra señales de los receptores de antígeno y de las vías de citocinas para coordinar estados metabólicos y proliferativos durante las respuestas inmunitarias. La actividad desregulada de IRF4 y las redes transcripcionales alteradas están implicadas en la inflamación mediada por el sistema inmunitario y en la biología de las neoplasias hematológicas, lo que convierte a IRF-4 en un nodo clave para estudios mecanísticos de señalización inmunitaria y regulación transcripcional.

IRF-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IRF4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IRF-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IRF4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IRF4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRF-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IRF4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRF-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRF-4 en células tumorales con expresión de IRF4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.