Plásmido CRISPR de Activación (r) IRF-1: sc-437365-ACT

El factor regulador de interferón 1 (IRF-1) es un factor de transcripción específico de secuencia que integra la señalización de interferón con programas inmunitarios innatos y adaptativos en células de rata. Tras su activación aguas abajo de las vías JAK/STAT, IRF-1 promueve la transcripción de genes estimulados por interferón implicados en la restricción antiviral, el procesamiento y la presentación de antígenos, y las redes de citocinas/quimiocinas, además de influir en los puntos de control del ciclo celular y la apoptosis. Mediante la interacción cruzada con NF-κB y otros reguladores sensibles al estrés, IRF-1 ayuda a moldear la expresión génica inflamatoria y la diferenciación de las células inmunitarias. La actividad desregulada de IRF-1 se ha asociado con una activación inmunitaria aberrante y una defensa del hospedador deteriorada en modelos experimentales, lo que respalda su relevancia en estudios de infección, inflamación y lesión tisular mediada por el sistema inmunitario.

IRF-1 El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IRF-1 El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRF-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRF-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRF-1 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.