Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRE1β (m): sc-424138

Présentation

Ern2 code l’enzyme 1 bêta requérant l’inositol (IRE1β), une kinase/endoribonucléase transmembranaire résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui agit comme capteur de stress au sein de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En cas de stress du RE, IRE1β contribue à l’homéostasie du RE via la dégradation régulée d’ARN dépendante d’IRE1 (RIDD) et la modulation de l’épissage de l’ARNm Xbp1, influençant la capacité sécrétoire, la différenciation épithéliale et la signalisation inflammatoire. Chez la souris, Ern2 est enrichi dans les épithéliums muqueux et sécrétoires, où il aide à coordonner la demande en repliement des protéines avec les programmes liés à la barrière et aux mucines. La dérégulation des voies de stress du RE impliquant IRE1β est pertinente pour l’étude de l’inflammation intestinale, des défauts de la couche de mucus, des interactions hôte–microbiote et des phénotypes de stress métabolique dans les tissus épithéliaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRE1β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ern2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ern2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ern2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRE1β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ern2 pour l'étude de la signalisation de IRE1β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ern2 essentiels à la fonction de IRE1β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ern2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRE1β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IRE1β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ern2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRE1β plasmide HDR (m) et le IRE1β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ern2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ern2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.