Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRAK-2: sc-404304-ACT

L’IRAK2 humain code la kinase 2 associée au récepteur de l’interleukine‑1 (IRAK‑2), une kinase de signalisation qui relie l’activation des récepteurs Toll‑like (TLR) et du récepteur de l’IL‑1 à des programmes transcriptionnels inflammatoires en aval. IRAK‑2 agit au sein de la voie dépendante de MyD88 pour favoriser l’assemblage et la signalisation du complexe IRAK, facilitant l’activation des cascades NF‑κB et MAPK et modulant l’expression des cytokines et des chimiokines. Par ces mécanismes, IRAK‑2 contribue à coordonner les réponses immunitaires innées, et une signalisation dérégulée est associée à l’inflammation chronique et à une altération de l’homéostasie immunitaire. Les connexions de cette voie font d’IRAK2 un nœud pertinent pour étudier des sorties transcriptionnelles dépendantes du stimulus, la régulation par rétrocontrôle et le dialogue croisé entre les voies inflammatoires et les voies de réponse au stress.

IRAK-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRAK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRAK-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRAK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRAK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRAK-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRAK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRAK-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRAK-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRAK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.