Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRAK-1 (m): sc-421100

Présentation

Irak1 code la kinase 1 associée au récepteur de l’interleukine‑1 (IRAK‑1), une kinase sérine/thréonine qui agit comme un transducteur central de signaux en aval de l’activation du récepteur de l’IL‑1 et des récepteurs de type Toll (TLR) dans les cellules immunitaires innées murines. Après stimulation des récepteurs, IRAK‑1 participe à la signalisation dépendante de MyD88, en coordonnant l’assemblage du complexe IRAK–TRAF6 afin de favoriser l’activation des voies NF‑κB et MAPK et l’expression subséquente de gènes inflammatoires. IRAK‑1 contribue également à la régulation de la production de cytokines, des réponses interféron, ainsi qu’au dialogue avec des voies de signalisation dépendantes de l’ubiquitine et des processus liés à l’inflammasome. Une signalisation IRAK‑1 dérégulée est pertinente dans des modèles expérimentaux d’inflammation chronique et d’auto-immunité, de susceptibilité aux infections, et de phénotypes du microenvironnement tumoral associés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRAK-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Irak1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Irak1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Irak1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRAK-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Irak1 pour l'étude de la signalisation de IRAK-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Irak1 essentiels à la fonction de IRAK-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Irak1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRAK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IRAK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Irak1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRAK-1 plasmide HDR (m) et le IRAK-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Irak1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Irak1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.