IRAK-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421100

Panoramica

Irak1 codifica la chinasi 1 associata al recettore dell’interleuchina-1 (IRAK-1), una chinasi serina/treonina che funge da trasduttore centrale del segnale a valle dell’attivazione del recettore dell’IL-1 e dei recettori Toll-like nelle cellule dell’immunità innata del topo. In seguito alla stimolazione recettoriale, IRAK-1 partecipa alla segnalazione dipendente da MyD88, coordinando l’assemblaggio del complesso IRAK–TRAF6 per promuovere l’attivazione delle vie di NF-κB e MAPK e la conseguente espressione di geni infiammatori. IRAK-1 contribuisce inoltre alla regolazione della produzione di citochine, delle risposte interferoniche e del cross-talk con la segnalazione dipendente dall’ubiquitina e con processi legati all’inflammasoma. Una segnalazione di IRAK-1 deregolata è rilevante in modelli sperimentali di infiammazione cronica e autoimmunità, nella suscettibilità alle infezioni e nei fenotipi del microambiente tumorale associati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRAK-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Irak1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Irak1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Irak1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRAK-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Irak1 per lo studio della segnalazione di IRAK-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Irak1 critici per la funzione di IRAK-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Irak1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IRAK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IRAK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Irak1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IRAK-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IRAK-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Irak1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Irak1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.