Plásmido Doble Nickase (h) IP3KA: sc-404638-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)IP3KA consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IP3KA (h) y el plásmido de doble nickasa IP3KA (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ITPKA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IP3KA Anticuerpo (F-3): sc-271838
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) IP3KA | sc-404638-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) IP3KA | sc-404638-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano ITPKA codifica la inositol-trisfosfato 3-quinasa A (IP3KA), una enzima regulada por Ca2+/calmodulina que fosforila el inositol 1,4,5-trisfosfato (IP3) para generar IP4, modelando así la dinámica de la señalización intracelular del calcio. Al modular la liberación de Ca2+ dependiente de IP3 desde el retículo endoplásmico, IP3KA influye en la función sináptica, la remodelación del citoesqueleto y programas de señalización dependientes de la actividad, incluidas vías que acoplan los transitorios de calcio a respuestas transcripcionales. En neuronas, IP3KA está enriquecida en las espinas dendríticas y se ha relacionado con mecanismos subyacentes a la plasticidad y la excitabilidad mediante la regulación de efectores sensibles al Ca2+. La alteración del equilibrio IP3/IP4 y de la homeostasis del calcio asociada a la desregulación de ITPKA es relevante para la neurobiología y también se ha investigado en contextos de señalización aberrante y fenotipos de migración en modelos de enfermedad.
IP3KA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITPKA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITPKA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITPKA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITPKA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.