Integrin αV/ITGAV/CD51 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400506-LAC

ITGAV codifica l’integrina αV (CD51), una subunità α che si associa a integrine β (più comunemente ITGB3, ITGB5, ITGB6 o ITGB8) per formare recettori per ligandi della matrice extracellulare quali vitronectina, fibronectina, osteopontina e complessi latenti di TGF-β. Attraverso la segnalazione outside-in e inside-out, le integrine contenenti αV regolano la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro di actina e la meccanotrasduzione tramite le vie FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. L’integrina αV contribuisce inoltre alla migrazione e all’invasione cellulare, alla segnalazione di sopravvivenza e al crosstalk con i recettori dei fattori di crescita, modulando il rimodellamento tissutale e le risposte infiammatorie. La deregolazione dell’attività di ITGAV e della segnalazione mediata da integrine αV è spesso oggetto di studio nella progressione tumorale, nell’angiogenesi, nella fibrosi e nella biologia dell’osso e del sistema immunitario, dove risultano coinvolti programmi alterati di adesione e di attivazione del TGF-β.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin αV/ITGAV/CD51 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ITGAV in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin αV/ITGAV/CD51 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ITGAV, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin αV/ITGAV/CD51. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ITGAV e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.