Integrin β4/ITGB4/CD104 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-431434-LAC

Itgb4 codifica l’integrina β4 (ITGB4/CD104), un recettore di adesione legante la laminina che si associa all’integrina α6 per formare α6β4, un componente strutturale chiave degli emidesmosomi nei tessuti epiteliali. Tramite il collegamento ad adattatori del citoscheletro e della segnalazione, α6β4 sostiene l’ancoraggio alla membrana basale e regola processi che includono polarità cellulare, migrazione e sopravvivenza, con connessioni funzionali alla dinamica delle adesioni focali e ai programmi di segnalazione associati a PI3K/AKT e MAPK. Un’espressione o una localizzazione deregolata di ITGB4 è stata associata a un’alterata integrità epiteliale e a un comportamento invasivo in modelli di cancro, ed è ampiamente studiata nel contesto della biologia della barriera cutanea e delle vie aeree, della riparazione delle ferite e delle interazioni epitelio–stroma.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin β4/ITGB4/CD104 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Itgb4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin β4/ITGB4/CD104 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Itgb4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin β4/ITGB4/CD104. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Itgb4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.