Integrin β4/ITGB4/CD104 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400573-LAC

ITGB4 codifica l’integrina β4 (CD104), una subunità di integrina legante la laminina che si associa prevalentemente con l’integrina α6 per formare α6β4, un recettore di adesione chiave nelle cellule epiteliali. Attraverso l’assemblaggio degli emidesmosomi e il collegamento ai filamenti intermedi tramite plectina, ITGB4 stabilizza l’ancoraggio tra cellula e membrana basale, partecipando al contempo a processi di segnalazione che regolano polarità, sopravvivenza e migrazione. Al di fuori delle adesioni stabili, α6β4 può attivare vie come PI3K–AKT, MAPK e la segnalazione associata alle adesioni focali per modulare il rimodellamento del citoscheletro e le risposte allo stress. Un’espressione o una distribuzione deregolata di ITGB4 viene spesso analizzata in relazione a disfunzioni della barriera epiteliale, rimodellamento tissutale e fenotipi di invasione/metastasi delle cellule tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare la segnalazione dipendente dall’adesione e le interazioni con il microambiente.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin β4/ITGB4/CD104 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ITGB4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin β4/ITGB4/CD104 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ITGB4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin β4/ITGB4/CD104. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ITGB4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.