Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α4/ITGA4/CD49d (h): sc-401336

Présentation

ITGA4 code l’intégrine α4 (CD49d), un récepteur d’adhésion qui s’hétérodimérise avec β1 (VLA-4) ou β7 pour médiatiser des interactions cellule–cellule et cellule–matrice avec des ligands tels que VCAM-1 et la fibronectine. Par la signalisation « outside-in » des intégrines, ITGA4 influence le remodelage du cytosquelette, la dynamique des adhérences focales et des voies en aval, notamment FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, qui régissent la migration, la survie et les états d’activation. L’intégrine α4 est un régulateur clé du trafic leucocytaire, de l’organisation de la synapse immunologique et du tropisme tissulaire, ce qui la relie aux circuits inflammatoires et aux interactions tumeur–stroma. Une activité ou une expression dérégulée d’ITGA4 est fréquemment étudiée dans des contextes d’inflammation chronique, d’infiltration de cellules immunitaires et d’adhérence de cellules de malignités hématologiques au sein de niches de soutien.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α4/ITGA4/CD49d (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ITGA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ITGA4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ITGA4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin α4/ITGA4/CD49d.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ITGA4 pour l'étude de la signalisation de Integrin α4/ITGA4/CD49d, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ITGA4 essentiels à la fonction de Integrin α4/ITGA4/CD49d
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ITGA4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin α4/ITGA4/CD49d plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Integrin α4/ITGA4/CD49d plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ITGA4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin α4/ITGA4/CD49d plasmide HDR (h) et le Integrin α4/ITGA4/CD49d (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ITGA4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ITGA4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.