ING2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404193-ACT

ING2 (membro 2 da família inibidora de crescimento) é uma proteína associada à cromatina vinculada à supressão tumoral que atua como leitora da trimetilação da lisina 4 da histona H3 (H3K4me3) por meio do seu domínio PHD finger, ajudando a conectar o estado epigenético ao controle transcricional. Em células humanas, a ING2 participa do remodelamento da cromatina e do equilíbrio entre acetilação e desacetilação de histonas por meio de interações com complexos que contêm HDAC, influenciando assim a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e a apoptose. Ela também se integra à sinalização de estresse dependente de p53 e contribui para a manutenção da estabilidade genômica. Alterações na expressão ou na função de ING2 têm sido associadas à proliferação desregulada e à reprogramação epigenética observadas em múltiplos contextos de câncer, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de sinalização oncogênica e regulação da cromatina.

ING2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ING2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ING2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ING2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ING2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ING2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ING2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ING2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ING2 em células tumorais com expressão de ING2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.