Plásmido CRISPR de Activación (h) ING2: sc-404193-ACT

ING2 (miembro 2 de la familia de inhibidores del crecimiento) es una proteína asociada a la cromatina vinculada a la supresión tumoral que actúa como lectora de la trimetilación de la lisina 4 de la histona H3 (H3K4me3) mediante su dominio PHD, ayudando a acoplar el estado epigenético al control transcripcional. En células humanas, ING2 participa en la remodelación de la cromatina y en el equilibrio de acetilación/desacetilación de histonas a través de interacciones con complejos que contienen HDAC, influyendo así en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la apoptosis. También interactúa con la señalización de estrés dependiente de p53 y contribuye al mantenimiento de la estabilidad genómica. La alteración de la expresión o la función de ING2 se ha asociado con la proliferación desregulada y la reprogramación epigenética observadas en múltiples contextos de cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de señalización oncogénica y regulación de la cromatina.

ING2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ING2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ING2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ING2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ING2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ING2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ING2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ING2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ING2 en células tumorales con expresión de ING2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.