Plásmido CRISPR de Activación (h) INDOL1: sc-403856-ACT

La IDO2 humana (indoleamina 2,3-dioxigenasa 2; INDOL1) es una enzima dependiente de hemo implicada en el catabolismo del triptófano que contribuye al flujo de la vía de la quinurenina y al control local de la disponibilidad de aminoácidos. Al modular el agotamiento de triptófano y los metabolitos derivados de la quinurenina, la IDO2 puede influir en las respuestas celulares al estrés, el equilibrio redox y los programas de señalización inmunorreguladora. La actividad de la IDO2 se cruza con vías que determinan la presentación de antígenos, la producción de mediadores inflamatorios y la adaptación metabólica, lo que la hace relevante para estudios sobre evasión inmunitaria, inflamación crónica e inmunometabolismo asociado a tumores. La desregulación de enzimas de la vía de la quinurenina, incluida la IDO2, se ha asociado con alteraciones del tono inmunitario y de los fenotipos metabólicos observados en contextos de cáncer y enfermedades inflamatorias.

INDOL1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IDO2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

INDOL1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IDO2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IDO2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de INDOL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IDO2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de INDOL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía INDOL1 en células tumorales con expresión de IDO2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.