Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-3Rα (m): sc-421109
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- IL-3Rα Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique IL-3Rα, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IL-3Rα Antibody (C-5): sc-74522
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-3Rα (m) | sc-421109 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Il3ra code la chaîne alpha du récepteur de l’interleukine‑3 (IL‑3Rα, CD123), qui confère la spécificité de liaison au ligand et forme, avec la chaîne bêta commune, un complexe de signalisation permettant de transmettre les signaux dépendants de l’IL‑3. Dans les cellules hématopoïétiques et immunitaires murines, IL‑3Rα régule la prolifération, la survie et la différenciation, en activant en aval les voies JAK/STAT, PI3K/AKT et MAPK qui façonnent les réponses de la lignée myéloïde. Une signalisation IL‑3Rα altérée peut perturber l’homéostasie induite par les cytokines et les programmes inflammatoires, faisant d’Il3ra une cible utile pour l’étude de l’hématopoïèse, des états d’activation myéloïde et des interactions (cross‑talk) entre récepteurs de cytokines. Le récepteur est également largement utilisé comme marqueur d’immunophénotypage pour explorer le développement et l’hétérogénéité fonctionnelle au sein des compartiments hématopoïétiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-3Rα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Il3ra dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Il3ra, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Il3ra à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-3Rα.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Il3ra pour l'étude de la signalisation de IL-3Rα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Il3ra essentiels à la fonction de IL-3Rα
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Il3ra pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le IL-3Rα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IL-3Rα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Il3ra. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le IL-3Rα plasmide HDR (m) et le IL-3Rα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Il3ra pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Il3ra définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.