Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1Rrp2 (h): sc-406998

Présentation

IL1RL2 code pour IL-1Rrp2, un membre de la famille des récepteurs de l’interleukine‑1 impliqué dans la signalisation de l’immunité innée et des muqueuses. En tant que récepteur des cytokines IL‑36, IL‑1Rrp2 recrute la protéine accessoire du récepteur de l’IL‑1 afin d’induire une signalisation dépendante de MyD88, activant les voies NF‑κB et MAPK qui régulent l’expression des gènes inflammatoires et les réponses de la barrière épithéliale. IL1RL2 est exprimé dans les compartiments immunitaires et épithéliaux et est fréquemment étudié dans le contexte de l’inflammation induite par les cytokines, notamment lors de processus inflammatoires cutanés et des voies aériennes. Une dérégulation de la signalisation IL‑36–IL‑1Rrp2 a été associée à des phénotypes inflammatoires, ce qui fait de cette cible un élément pertinent pour des études mécanistiques des réseaux de cytokines et de l’inflammation tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1Rrp2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IL1RL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IL1RL2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IL1RL2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-1Rrp2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IL1RL2 pour l'étude de la signalisation de IL-1Rrp2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IL1RL2 essentiels à la fonction de IL-1Rrp2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IL1RL2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-1Rrp2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IL-1Rrp2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IL1RL2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-1Rrp2 plasmide HDR (h) et le IL-1Rrp2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IL1RL2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IL1RL2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.