IL-17RB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404114-ACT

IL17RB codifica il recettore B dell’interleuchina-17 (IL-17RB), un recettore citochinico transmembrana di tipo I che si associa a IL17RA per trasdurre i segnali dei ligandi della famiglia IL-17, in particolare IL-25 (IL-17E). Il legame del recettore recluta proteine adattatrici come ACT1 per attivare i programmi di segnalazione di NF-κB e MAPK, collegando il riconoscimento da parte di cellule epiteliali e stromali alla produzione di chemochine, all’infiammazione mucosale e alla polarizzazione della risposta immunitaria di tipo 2. L’attività di IL-17RB influenza il dialogo tra vie aeree e tessuti di barriera, cellule mieloidi e sottopopolazioni linfoidi, modulando le risposte ad allergeni ed elminti, nonché processi più ampi di rimodellamento infiammatorio. Un’espressione o una segnalazione di IL17RB deregolata è stata associata a stati infiammatori cronici e a cambiamenti del microambiente immunitario associato ai tumori, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione immunitaria e sulla comunicazione cellula–cellula.

IL-17RB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IL17RB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IL-17RB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IL17RB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IL17RB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IL-17RB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IL17RB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IL-17RB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IL-17RB nelle cellule tumorali con espressione di IL17RB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.