IK1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402139-LAC

KCNN4 codifica il canale del K+ attivato dal Ca2+ a conduttanza intermedia IK1 (KCa3.1), una proteina di membrana che accoppia i segnali di calcio intracellulari all’efflusso di potassio e all’iperpolarizzazione della membrana. Modellando il potenziale di membrana e l’ingresso di calcio, IK1 influenza processi quali la regolazione del volume cellulare, il trasporto epiteliale di elettroliti e la segnalazione dipendente dall’attivazione nelle cellule immunitarie. L’attività di KCNN4/IK1 interseca vie Ca2+-dipendenti che modulano proliferazione, migrazione e risposte citochiniche, rendendolo rilevante per studi su infiammazione e rimodellamento tissutale. Un’alterata funzione di IK1 è stata associata a cambiamenti patologici nella biologia vascolare, delle vie aeree e del sistema immunitario, supportandone l’impiego come bersaglio meccanicistico nella modellizzazione delle malattie.

Le particelle di attivazione lentivirale IK1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KCNN4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IK1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KCNN4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IK1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KCNN4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.