IGSF10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-415415-NIC

IGSF10は、細胞間コミュニケーションや、組織の構築および発生パターン形成に影響を与える細胞外マトリックス関連の接着過程に関与するとされる、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜貫通タンパク質をコードします。発現解析および遺伝学的研究から、IGSF10は移動能に関わる挙動や、細胞接着・細胞骨格リモデリング・分化プログラムと交差するシグナル環境の調節に関与することが示唆されています。ヒトにおいては、神経発達のタイミングや生殖軸の制御との関連で研究されており、思春期遅発の表現型との関連が報告されているほか、腫瘍生物学における状況依存的な因子としても検討されています。これらの特徴から、IGSF10は、接着に関連する制御ネットワークと、関連する細胞モデルにおける表現型アウトカムを解析するための有用な標的となります。

IGSF10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IGSF10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IGSF10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IGSF10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IGSF10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。