Plásmido CRISPR de Activación (h) IGFBP7: sc-418272-ACT

IGFBP7 (proteína 7 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina, insulin-like growth factor binding protein 7) es una proteína matricelular secretada que modula la señalización de IGF/insulina al unirse a los IGF e interactuar con componentes de la matriz extracelular para influir en la disponibilidad del ligando y en la activación del receptor. Contribuye a la regulación de la adhesión celular, la senescencia y las respuestas al estrés, y se ha relacionado con la biología de células endoteliales y de músculo liso, incluidas vías que controlan la remodelación vascular y el recambio de la matriz extracelular. Con frecuencia se observan cambios en la expresión de IGFBP7 en contextos de fibrosis, inflamación y remodelación del microambiente tumoral, donde puede afectar programas de proliferación, migración y angiogénesis. Estas propiedades hacen de IGFBP7 una diana útil para estudios mecanísticos del crosstalk en la señalización de factores de crecimiento y de fenotipos impulsados por la MEC en sistemas celulares humanos.

IGFBP7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGFBP7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGFBP7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGFBP7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGFBP7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGFBP7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGFBP7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGFBP7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGFBP7 en células tumorales con expresión de IGFBP7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.