Plásmido CRISPR de Activación (h) IGFBP4: sc-402342-ACT

IGFBP4 codifica la proteína de unión al factor de crecimiento similar a la insulina 4 (IGFBP4), un regulador secretado que modula la biodisponibilidad de IGF‑I e IGF‑II y la señalización downstream impulsada por IGF1R. Al unirse a los IGF en el espacio extracelular, IGFBP4 influye en la actividad de las vías PI3K–AKT y MAPK, dando forma a la proliferación, la supervivencia y la diferenciación celulares, así como a la remodelación tisular. La actividad de IGFBP4 también se asocia con la dinámica de la matriz extracelular y el procesamiento proteolítico, integrando el control de los factores de crecimiento con señales del microambiente. Se han descrito alteraciones en la expresión de IGFBP4 en contextos de biología cardiovascular, homeostasis esquelética, remodelación asociada a fibrosis y señalización de crecimiento relacionada con el cáncer, lo que respalda su valor como diana mecanística de investigación.

IGFBP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGFBP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGFBP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGFBP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGFBP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGFBP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGFBP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGFBP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGFBP4 en células tumorales con expresión de IGFBP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.