Plásmido CRISPR de Activación (m) IFN-γ/Interferon gamma: sc-421050-ACT

El gen Ifng de ratón codifica el interferón gamma (IFN-γ), un interferón pleiotrópico de tipo II que coordina las respuestas inmunitarias innata y adaptativa mediante la activación de macrófagos y la inducción de la polarización de los linfocitos T colaboradores tipo 1 (Th1). El IFN-γ señaliza principalmente a través de IFNGR1/IFNGR2 para activar JAK1/JAK2 y STAT1, induciendo genes estimulados por interferón que potencian el procesamiento y la presentación de antígenos, las defensas antimicrobianas y la retroalimentación inmunorreguladora. Esta citocina se integra con programas transcripcionales impulsados por NF-κB e IRF, influyendo en la producción de quimiocinas, la expresión de MHC y los estados de diferenciación celular. La actividad desregulada de IFN-γ se asocia con patología inflamatoria y autoinmune, susceptibilidad a patógenos, vigilancia inmunitaria antitumoral y procesos neuroinflamatorios, lo que convierte a Ifng en un nodo central para estudios de inmunología mecanística.

IFN-γ/Interferon gamma El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ifng sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFN-γ/Interferon gamma El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ifng en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ifng, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFN-γ/Interferon gamma. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ifng y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFN-γ/Interferon gamma en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFN-γ/Interferon gamma en células tumorales con expresión de Ifng silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.