IFN-αB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421046

Descripción general

El gen murino Ifnab codifica el interferón alfa-B (IFN-αB), un interferón de tipo I que amplifica las defensas antivirales innatas y moldea las respuestas inmunitarias adaptativas posteriores. Tras la señalización de receptores de reconocimiento de patrones a través de vías como cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS y los TLR endosómicos, el IFN-αB se une a IFNAR para activar la señalización JAK–STAT e impulsar la transcripción de genes estimulados por interferón, que modulan la presentación de antígenos, la apoptosis y las redes de citocinas inflamatorias. La actividad desregulada del interferón de tipo I se ha implicado en la inflamación crónica y la autoinmunidad, y las firmas de interferón alteradas se examinan con frecuencia en modelos de infección viral y patología mediada por el sistema inmunitario. Por tanto, la función de Ifnab es relevante para estudios de interacciones huésped–patógeno, la programación de células mieloides y linfoides, y las respuestas tisulares impulsadas por interferón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IFN-αB (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ifnab en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ifnab junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ifnab tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IFN-αB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ifnab para la investigación de la señalización de IFN-αB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ifnab críticos para la función de IFN-αB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ifnab para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IFN-αB CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IFN-αB CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ifnab. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IFN-αB (m) y el plásmido HDR IFN-αB (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ifnab para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ifnab definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.