IFN-α7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421044

Übersicht

Ifna7 kodiert das murine Interferon-α7 (IFN-α7), ein Typ-I-Interferon-Zytokin, das vor allem als Antwort auf virale Signale und die Erkennung von Nukleinsäuren gebildet wird. IFN-α7 bindet an den IFNAR-Rezeptorkomplex und aktiviert eine JAK1/TYK2-abhängige Phosphorylierung von STAT1/STAT2, wodurch die Bildung des Transkriptionskomplexes ISGF3 sowie die Induktion interferon-stimulierter Gene gefördert werden, die die angeborene und adaptive Immunität prägen. Diese Signalkaskade überschneidet sich mit Signalwegen von Mustererkennungsrezeptoren, einschließlich TLR- und RIG-I-ähnlicher Rezeptoren, und beeinflusst Antigenpräsentation, Zytokinnetzwerke und antivirale Restriktionsprogramme. Eine dysregulierte Typ-I-Interferon-Aktivität wird mit entzündlichen und autoimmunen Phänotypen sowie mit Tumor-Immun-Interaktionen in Verbindung gebracht, was Ifna7 zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der interferongetriebenen Biologie macht.

Das IFN-α7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ifna7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ifna7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ifna7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IFN-α7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ifna7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IFN-α7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ifna7-Exone abzielen, die für die IFN-α7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ifna7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IFN-α7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IFN-α7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ifna7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IFN-α7 HDR-Plasmid (m) und IFN-α7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ifna7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ifna7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.