Plásmido CRISPR de Activación (h) IFITM3: sc-403281-ACT

La proteína transmembrana inducida por interferón 3 (IFITM3) es el producto de un gen estimulado por interferón que se localiza predominantemente en las membranas endosómicas y lisosómicas, donde restringe la entrada de una amplia gama de virus envueltos. Al alterar las propiedades y el tráfico de las membranas, IFITM3 modula la captación endocítica y los eventos de fusión aguas abajo de la señalización inmunitaria innata, incluidas las vías de interferón de tipo I y III. La variación en la expresión o la función de IFITM3 se ha asociado con diferencias en la susceptibilidad y la gravedad de las infecciones respiratorias virales, lo que la convierte en un nodo estudiado con frecuencia que vincula las respuestas a interferón con el control de la entrada en la célula huésped. IFITM3 también se investiga en el contexto de la señalización inflamatoria y las respuestas al estrés celular que remodelan la dinámica de membrana y el transporte vesicular.

IFITM3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFITM3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFITM3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFITM3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFITM3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFITM3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFITM3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFITM3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFITM3 en células tumorales con expresión de IFITM3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.