ICMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406029

Übersicht

ICMT (Isoprenylcystein-Carboxyl-Methyltransferase) ist ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes Enzym, das nach proteolytischer Prozessierung die Methylesterifizierung prenylierter Cysteinreste am C‑Terminus von CAAX-Proteinen katalysiert – ein abschließender Schritt der Proteinprenylierung. Diese Modifikation moduliert die Membranassoziation und den subzellulären Transport kleiner GTPasen und verwandter Signalproteine und beeinflusst Signalwege wie RAS/MAPK, PI3K–AKT sowie die Regulation des Zytoskeletts. Durch die Steuerung von Lokalisation und Aktivität prenylierter Substrate trägt ICMT zur Kontrolle von Zellwachstum, Polarität und vesikulärem Transport bei. Veränderte Prenylierungsdynamiken und eine ICMT-abhängige Prozessierung wurden mit onkogenem Signaling und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, bei denen fehlgeleitete prenylierte Proteine die zelluläre Homöostase stören.

Das ICMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ICMT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ICMT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ICMT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ICMT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ICMT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ICMT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ICMT-Exone abzielen, die für die ICMT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ICMT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ICMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ICMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ICMT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ICMT HDR-Plasmid (h) und ICMT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ICMT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ICMT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.