Partículas Lentivirales de Activación (h) ICK: sc-406371-LAC

La quinasa de células intestinales (ICK) es una proteína quinasa de serina/treonina de la familia CMGC que integra señales que controlan la progresión del ciclo celular, la biología del cilio primario y la dinámica del citoesqueleto. ICK se localiza en el cilio y en el cuerpo basal, donde regula el transporte intraflagelar y la longitud ciliar, lo que la vincula con la señalización del desarrollo dependiente de Hedgehog y con el control de la proliferación. La alteración de la actividad de ICK se ha asociado con fenotipos relacionados con ciliopatías y trastornos del desarrollo, y la desregulación de redes de señalización de quinasas que involucran a ICK se ha investigado en contextos de crecimiento y diferenciación aberrantes. Como resultado, ICK es una diana útil para desentrañar vías impulsadas por quinasas que acoplan la ciliogénesis a programas transcripcionales y transiciones del estado celular.

Las partículas de activación lentiviral ICK (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ICK en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ICK (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ICK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ICK. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ICK y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.