Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (h): sc-400098-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ICAM-1/CD54 Double-Nickase-Plasmid (h) und ICAM-1/CD54 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ICAM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ICAM-1/CD54: sc-8439
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400098-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ICAM-1/CD54 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400098-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ICAM1 kodiert das Intercellular Adhesion Molecule 1 (ICAM-1/CD54), einen induzierbaren Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der auf Endothelzellen und mehreren Leukozyten-Subpopulationen exprimiert wird und die feste Adhäsion sowie die Transmigration von Immunzellen unterstützt. ICAM-1 bindet Integrine wie LFA-1 (ITGAL/ITGB2) und MAC-1 (ITGAM/ITGB2) und koppelt dadurch zytokingesteuerte Aktivierungsprogramme an Leukozytenarrest, Diapedese und die Stabilität der immunologischen Synapse. Seine Expression wird stark durch inflammatorische Signalwege reguliert, darunter NF-κB- und MAPK-Kaskaden nachgeschaltet von TNF-α, IL-1 und Pattern-Recognition-Rezeptoren, und trägt zur Endothelaktivierung sowie zur Immunzellinfiltration in Gewebe bei. Eine fehlregulierte ICAM1-Expression ist mit chronischen Entzündungszuständen, vaskulärer Inflammation und Tumor–Immun-Interaktionen assoziiert, weshalb ICAM1 häufig als Marker und als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung von Leukozyten-Trafficking und inflammatorischen Mikroumgebungen verwendet wird.
ICAM-1/CD54 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ICAM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ICAM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ICAM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ICAM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.