HXK II CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400611-ACT

ヒトHK2は、ミトコンドリアに結合して存在する酵素であるヘキソキナーゼII（HXK II）をコードしており、ATP依存的にグルコースをグルコース-6-リン酸へリン酸化する反応を触媒します。これにより、グルコースは解糖系および関連する生合成経路へと取り込まれます。解糖系フラックスをミトコンドリア代謝と結び付けることで、HXK IIは細胞のエネルギーホメオスタシス、酸化還元（レドックス）バランス、さらにペントースリン酸経路やヌクレオチド／脂質合成に供給される同化前駆体に影響を与えます。HK2の発現上昇と解糖系の再配線は、増殖状態やストレス適応状態でしばしば観察され、HXK IIはがん生物学における代謝リプログラミング、免疫細胞の活性化、低酸素応答シグナル伝達と関連付けられています。HK2活性の変化は、インスリン応答組織や代謝疾患の機序にも関与するとされており、グルコース利用とミトコンドリア—代謝クロストークを研究するうえで広く用いられる標的（ノード）となっています。

HXK II CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HXK II CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HXK IIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHXK II依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHXK II経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。