HUNK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405786

Übersicht

HUNK (hormonell hochregulierte Neu-assoziierte Kinase) kodiert eine Serin/Threonin-Proteinkinase aus der Familie der AMPK-verwandten Kinasen, die wachstumsfaktor- und hormonabhängige Signalübertragung mit dem Verhalten epithelialer Zellen verknüpft. HUNK wird mit der Regulation von Programmen zur Zellüberlebenssicherung, der Aufrechterhaltung der Zellpolarität sowie von vesikel- und traffickingbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, die Adhäsion und Migration beeinflussen; zudem wurden Zusammenhänge mit Output-Signalen der PI3K–AKT- und MAPK-Netzwerke in Kontexten von Stress und Proliferation beschrieben. Eine dysregulierte HUNK-Expression oder -Aktivität wurde in mehreren krebsbezogenen Modellen beobachtet, in denen HUNK hinsichtlich seiner Rolle bei der Anpassung von Tumorzellen, metastatischen Eigenschaften und therapiebezogenen Antwortphänotypen untersucht wird. Darüber hinaus ist die HUNK-Biologie für das Cross-talk zwischen Kinasen in Brust- und Nervengewebe relevant und unterstützt mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen in krankheitsrelevanten Zellzuständen.

Das HUNK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HUNK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HUNK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HUNK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HUNK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HUNK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HUNK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HUNK-Exone abzielen, die für die HUNK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HUNK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HUNK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HUNK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HUNK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HUNK HDR-Plasmid (h) und HUNK HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HUNK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HUNK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.