Plásmido CRISPR de Activación (h) HUNK: sc-405786-ACT

HUNK (quinasa asociada a neu regulada hormonalmente, por sus siglas en inglés) codifica una quinasa de serina/treonina implicada en programas de transducción de señales que influyen en el comportamiento de las células epiteliales, incluida la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. Las funciones descritas vinculan a HUNK con vías sensibles a factores de crecimiento y con procesos de adaptación al estrés que pueden modular la polaridad celular y los fenotipos migratorios de manera dependiente del contexto. Se han observado alteraciones en la expresión o actividad de HUNK en múltiples modelos relacionados con el cáncer, lo que respalda su relevancia para estudiar mecanismos de señalización oncogénica y plasticidad celular. Como regulador asociado a quinasas, HUNK se investiga con frecuencia por cómo reconfigura redes de fosforilación aguas abajo y las salidas transcripcionales en sistemas celulares humanos.

HUNK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HUNK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HUNK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HUNK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HUNK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HUNK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HUNK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HUNK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HUNK en células tumorales con expresión de HUNK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.