HTF9C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407594-ACT

TRMT2A umano codifica HTF9C, una metiltransferasi dei tRNA implicata nella modificazione post-trascrizionale dell’RNA attraverso la formazione di 5‑metiluridina in posizioni specifiche del tRNA. Modellando la stabilità del tRNA e la fedeltà di decodifica, TRMT2A sostiene una traduzione efficiente e la proteostasi, processi che influenzano la progressione del ciclo cellulare e l’adattamento allo stress. L’alterazione delle reti di modificazione dei tRNA è stata associata a cambiamenti nel controllo traduzionale e nei programmi di mantenimento del genoma, rendendo TRMT2A/HTF9C rilevante per studi sulla segnalazione proliferativa e l’omeostasi cellulare. Cambiamenti di espressione e di funzione degli enzimi che modificano i tRNA sono spesso indagati in ambito oncologico e neurobiologico come contributori a una deregolazione dell’espressione genica a livello della traduzione.

HTF9C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRMT2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HTF9C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRMT2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRMT2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HTF9C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRMT2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HTF9C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HTF9C nelle cellule tumorali con espressione di TRMT2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.