HSPA8/HSC70 Lentiviral Activation Particles (h): sc-418508-LAC

HSPA8 (HSC70) kodiert ein konstitutiv exprimiertes Chaperon der HSP70-Familie, das die Proteostase unterstützt, indem es ATP-abhängige Proteinfaltung und -refaltung reguliert und Aggregation verhindert. HSC70 koordiniert die chaperonvermittelte Autophagie durch lysosomales Targeting von Substraten mit KFERQ-Motiv, ist an der clathrinvermittelten Endozytose beteiligt und unterstützt die Reifung sowie den Transport von Signalproteinen. Über Interaktionen mit Co-Chaperonen und dem Ubiquitin-Proteasom-System beeinflusst es Stressantworten, die Zytoskelettdynamik und die Qualitätskontrolle von Organellen. Eine Dysregulation HSPA8-assoziierter Chaperon-Netzwerke wurde mit Neurodegeneration, Überlebensprogrammen von Krebszellen und Wirt–Pathogen-Interaktionen in Verbindung gebracht und macht HSPA8 zu einem nützlichen Knotenpunkt für funktionsorientierte, pathway-fokussierte Studien.

HSPA8/HSC70 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HSPA8-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HSPA8/HSC70 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HSPA8-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HSPA8/HSC70-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HSPA8-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.